產(chǎn)品英文名稱(chēng)：Peroxidase Labeling Kit-NH2
產(chǎn)品中文名稱(chēng)：辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記試劑盒- NH2

Peroxidase Labeling Kit-NH2 產(chǎn)品特性
整個(gè)標(biāo)記過(guò)程僅需3個(gè)小時(shí)
整個(gè)標(biāo)記過(guò)程在1支過(guò)濾管中進(jìn)行
酶標(biāo)抗體回收率高

Peroxidase Labeling Kit-NH2 產(chǎn)品描述
該試劑盒主要用于制備酶免疫分析 (EIA) 所需的辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)IgG以及競(jìng)爭(zhēng)性EIA所需的辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)抗原。該試劑盒中的NH2-reactive peroxidase具有琥珀酰亞胺基 (NHS)，它能夠與含有NH2的蛋白質(zhì)或者其他分子反應(yīng)。該試劑盒包含了標(biāo)記過(guò)程中所需的所有試劑，包括儲(chǔ)存用緩沖液。標(biāo)記過(guò)程相當(dāng)簡(jiǎn)單：只需將IgG和NH2-reactive peroxidase混合并且在37℃下培養(yǎng)2小時(shí)。NH2-reactive peroxidase不需任何活化就可以和靶分子形成共價(jià)鍵。NHS與辣根過(guò)氧化物酶之間的距離大約為1.2 nm，為辣根過(guò)氧化物酶分子半徑的一半。因此，當(dāng)辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)IgG用于EIA時(shí)，NH2-reactive peroxidase的高效性足以使它在標(biāo)記后省去純化的過(guò)程。即使在標(biāo)記后需要有一個(gè)高純度的精制過(guò)程，也只要用親和柱或凝膠滲透柱就能簡(jiǎn)單達(dá)到目的。在標(biāo)記小分子的時(shí)候，使用試劑盒中包含的過(guò)濾管即可除去分子量較大的分子。由于NH2-reactive peroxidase自身的氨基已經(jīng)被阻斷，因此自身不會(huì)發(fā)生反應(yīng)。

Peroxidase Labeling Kit-NH2 試劑盒內(nèi)容
- NH2-Reactive Peroxidase ..... 100 ?g x 3 tubes -
- Reaction Buffer .................... 200 ?l x 1 tube -
- Filtration Tube ..................... 3 tubes
- Washing Buffer ................ 4 ml x 1 bottle
- Storage Buffer ................. 4 ml x 1 bottle

標(biāo)記IgG操作步驟
（1）將100 μl WS buffer以及含有100 μg IgG的樣品溶液加入到過(guò)濾管中。a）
（2）8,000-10,000 g離心10分鐘。b）
（3）將10 μl DMSO加入到NH2-reactive biotin中并用移液器吹打使其溶解。c）
（4）將100 μl Reaction buffer以及8 μl NH2-reactive biotin溶液加入到過(guò)濾管中，吹打使其混合。d）
（5）將過(guò)濾管放入培養(yǎng)箱中，37℃培養(yǎng)10分鐘。
（6）將100 μl WS buffer加入到過(guò)濾管中，8,000-10,000 g離心10分鐘，b）除去濾液。
（7）將200 μl WS buffer加入到過(guò)濾管中，8,000-10,000 g離心10分鐘，b）重復(fù)該步驟一次。
（8）將200 μl WS buffer加入到過(guò)濾管中吹打10-15次來(lái)回收標(biāo)記產(chǎn)物。e）將該溶液轉(zhuǎn)移到0.5 ml試管中，在0-5℃下保存。
  a）樣品溶液的體積不應(yīng)超過(guò)100 μl。如果抗體濃度低于1 mg/ml，重復(fù)步驟1和2直至總的IgG聚積量達(dá)到100 μg。如果聚積過(guò)程中濾液的體積超過(guò)400 μl，則在進(jìn)行后續(xù)的離心操作前應(yīng)除去濾液。
 b）如果溶液在離心后仍然殘留在膜上，可以再離心5分鐘或者適當(dāng)增加轉(zhuǎn)速。
 c）NH2-reactive biotin在管子的底部，向管底加入10 μl DMSO，吹打數(shù)次使其溶解。
 d）如果IgG的量為200 μg，在步驟4時(shí)加入所有的NH2-reactive biotin溶液。
 e）并不一定要使用WS buffer來(lái)回收標(biāo)記產(chǎn)物，可以選擇任何適合于該實(shí)驗(yàn)的緩沖液來(lái)替代。

Peroxidase Labeling Kit-NH2 注意事項(xiàng)
所需標(biāo)記的較大的蛋白質(zhì)的分子量要>50,000。
所需標(biāo)記的較小的氨基化合物的分子量要<5,000。
標(biāo)記過(guò)程中，標(biāo)記前后的IgG總是在過(guò)濾管的濾膜上。
如果IgG溶液含有其它分子量超過(guò)10,000的蛋白質(zhì)，如BSA或凝膠，在使用該試劑盒標(biāo)記前請(qǐng)先純化IgG溶液。IgG溶液能夠使用IgG純化試劑盒來(lái)純化（不包含于此試劑盒中）。如果IgG溶液中含有小的不溶物，離心后提取上清液來(lái)標(biāo)記。
如果長(zhǎng)時(shí)間不使用，建議您把試劑盒中的酶NH2-reactive peroxidase放在-20℃冰箱中保存，不需要充氮?dú)?，可以更好地保持酶的活性，但?qǐng)不要把其它試劑和過(guò)濾管放到-20℃冰箱中，仍請(qǐng)放在0-5℃冰箱中保存?！姹渲斜４妫恍枰涞?dú)?，可以更好地保持?biāo)記試劑的活性，但請(qǐng)不要把其它試劑和過(guò)濾管放到-20℃冰箱中，仍請(qǐng)放在0-5℃冰箱中保存。