在免疫印跡實(shí)驗(yàn)中遇到的質(zhì)控問(wèn)題之一最常見(jiàn)的就是高背景。當(dāng)一個(gè)高的背景發(fā)生時(shí)，很難從不相關(guān)的數(shù)據(jù)中區(qū)分出相關(guān)的數(shù)據(jù)。一個(gè)常見(jiàn)的高背景可以由于很多原因?qū)е峦瑫r(shí)需要一些工作來(lái)解決?—?因?yàn)椴唤鉀Q這些問(wèn)題，這個(gè)印跡無(wú)法讀取.
保證緩沖液沒(méi)有被污染
一個(gè)被污染的緩沖液在免疫印跡中很容易導(dǎo)致高的背景。大多數(shù)情況下，由于細(xì)菌的存在會(huì)導(dǎo)致被污染的緩沖液?—?但是也有其他的污染物.?當(dāng)污染物進(jìn)入到緩沖液中后，他們會(huì)影響整個(gè)印跡的整體,?包括背景.?解決這種干擾的辦法是將舊的緩沖液全部扔掉，重新配置新緩沖液。
確保操作步驟是完全恰當(dāng)?shù)?/strong>
另外一個(gè)能夠?qū)е赂弑尘暗脑蚴菦](méi)有進(jìn)行恰當(dāng)?shù)牟僮鞑襟E。差的膜操作，膜過(guò)度曝光，?以及不足的漂洗都會(huì)導(dǎo)致高背景。這些問(wèn)題可以通過(guò)恰當(dāng)操作來(lái)解決。當(dāng)膜變干的時(shí)候膜的糟糕操作通常會(huì)發(fā)生。如果沒(méi)有使用正確的化學(xué)試劑恰當(dāng)?shù)臐?rùn)濕膜會(huì)變干;?通常來(lái)說(shuō)是甲醇.
膜的過(guò)度曝光也是一個(gè)問(wèn)題?—?但是它很容易解決.?你所要做的是將膜曝光的時(shí)間縮短.?同樣的，不充分的漂洗只是需要將沖洗更加充分徹底.?漂洗用來(lái)去掉過(guò)量的抗體.?當(dāng)很多抗體存在印跡上時(shí)，很難將印跡和背景區(qū)分開(kāi)來(lái)。改進(jìn)的漂洗也可以通過(guò)使用更好的漂洗溶液來(lái)進(jìn)行。
去除不充分的封閉
沒(méi)有正確的封閉,?免疫印跡的結(jié)果無(wú)法容易讀取.?不充分的封閉通常發(fā)生因?yàn)樵诜跤^(guò)程中的問(wèn)題.?如果孵育的時(shí)間不足夠長(zhǎng)，正確的區(qū)域不能得到封閉.?如果孵育的溫度不正確的話,封閉也不能完成.?也有化學(xué)試劑可以加入到這個(gè)過(guò)程中來(lái)進(jìn)一步提高封閉.
保證封閉劑的兼容性
封閉劑,?如同在印跡實(shí)驗(yàn)中使用的其他產(chǎn)品一樣，需要根據(jù)特定的應(yīng)用進(jìn)行調(diào)整.?使用錯(cuò)誤的封閉劑很容易導(dǎo)致干擾和很差的難區(qū)分的印跡.?一些封閉劑基于血清蛋白的，而其他的是基于蛋白的。不同的抗體可以和封閉劑有潛在反應(yīng)，所以有必要找到最合適的封閉劑.?無(wú)蛋白的封閉劑是良好封閉劑之一也是最容易的溶液.
降低抗體的濃度
通常高濃度的抗體會(huì)導(dǎo)致高的背景.?因?yàn)榭贵w濃度太高了，整個(gè)膜會(huì)被抗體所包被.?這會(huì)使得出決定性的結(jié)論很難.?當(dāng)提到高濃度的抗體，只有很少一些解決方案可以解決。抗體可進(jìn)行恰當(dāng)漂洗或更低濃度的抗體可以被使用.?膜或許也需要恰當(dāng)?shù)奶幚?—?只要沒(méi)有過(guò)度干掉?—?它不會(huì)吸收很多的抗體溶液.
高背景也會(huì)發(fā)生當(dāng)使用的化學(xué)試劑和耗材不合適或質(zhì)量很差.?在免疫印跡中高背景是經(jīng)常顯著發(fā)生的多種問(wèn)題之一。.
其他需要考慮的因素之前已經(jīng)討論了就是轉(zhuǎn)印膜的選擇:?PVDF膜或硝酸纖維素膜 ?–?哪種膜最好?
一個(gè)經(jīng)常被忽視的問(wèn)題是膜的效期.??在使用膜之前,?確保它沒(méi)有過(guò)期同時(shí)被正確儲(chǔ)存。
華雅思創(chuàng)生物——G-Biosciences全國(guó)授權(quán)代理
華雅思創(chuàng)生物集團(tuán)的集團(tuán)子公司——上海華雅思創(chuàng)生物科技有限公司是一家為生命科學(xué)領(lǐng)域內(nèi)的科學(xué)研究、細(xì)胞治療和生物制藥相關(guān)人員提供優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品和服務(wù)的生物高科技公司，公司主辦的干細(xì)胞搜網(wǎng)(ys-bio,cn)為中國(guó)干細(xì)胞領(lǐng)域大資源庫(kù)，網(wǎng)站提供：干細(xì)胞治療產(chǎn)品、細(xì)胞培養(yǎng)試劑耗材、臍帶MSC間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基、IPS細(xì)胞ES胚胎干細(xì)胞培養(yǎng)基、DC細(xì)胞淋巴細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)基、R&D細(xì)胞因子等種類(lèi)豐富的產(chǎn)品；涉及StemCell、HY StemCell、StemRD、CellGenix、PeproTech、Corning、Thermo、Gibco、 PALL、LONZA、BD等國(guó)際公司品牌和生產(chǎn)廠家。以“Yes Service”核心服務(wù)理念，緊緊圍繞“Yes Service focus on Biology 越服務(wù) 專(zhuān)注生物”打造中華民族全新服務(wù)體系，我們與客戶攜手一起探索生命科學(xué)奧秘，解決人類(lèi)健康問(wèn)題，發(fā)展綠色環(huán)保生態(tài)，推動(dòng)世界和諧持續(xù)發(fā)展。
